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组织芯片构建服务

组织芯片(tissue chip),也称组织微阵列(tissue microarrays),是生物芯片技术的一个重要分支,是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上,进行同一指标的原位组织学研究。该技术自1998年问世以来,以其大规模、高通量、标准化等优点得到大范围的推广应用。其最大优势在于,芯片上的组织样本实验条件完全一致,有极好的质量控制。节省时间、节省试剂更是显而易见的。

  • 货  号:HFBL003
  • 品  牌:恒斐

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组织芯片制备的技术路线和基本制作过程:

通过组织芯片制作机细针打孔的方法,从众多的组织蜡块(称为供体蜡块,donor)中采集到数十至上百的圆柱形小组织(组织芯,tissue core),并将其整齐排列另一空白蜡块(称为受体蜡块,recipient)中,而制成组织芯片蜡块。然后对组织芯片蜡块进行切片,再将切片转移到载玻片上制成组织芯片。
 
1.芯片微陈列设计:在构建组织芯片之前,应该预先计划检测多少样本,然后相应地进行设计。对大多数研究来说,在一个常规的载玻片上放置60~100个样本已经足够了。当样本超过100例时,上样、切片、染色及研究各个步骤都要求相当熟练,并且由于样本排列过于紧密,有可能导致芯片制作和研究失败。因此在计划检测数百个到上千标本时可考虑多做几个组织芯片。
 
2.收集病例及相关蜡块:挑选出具有随访资料的不同发展阶段的肿瘤组织蜡块,根据HE切片对石蜡标本中有代表性的点进行标记,包括典型的肿瘤和相应的正常组织,以构建肿瘤组织芯片。
 
3.TMA受体蜡块制备:取97.5克莱卡石蜡+2.5克蜂蜡(2.5%)混合,制成长36mm*宽26mm*高17mm的空白蜡块,在该蜡块20mm×16mm范围内设计10×8点组织陈列。组织四周预留0.5cm-0.7cm空间,用组织仪打孔制成TMA蜡块。
 
4.在组织芯片制作机上用细针对受体蜡块打孔,孔径以1~1.5mm比较适宜。
 
5.同样在供体蜡块上标记的相应部位打孔采集组织芯。孔径同样为1~1.5mm。
 
6.将组织芯转移到受体模块的孔中,每个组织芯之间的间距以0.2mm为佳。
 
7.为了防止在打点、切片、染色或免疫组化过程中出现漏点,滑片及掉片现象,每个样本可以上样1-2个点。
 
8.将构建好的TMA芯片蜡块放在相宜的塑料盒子内,并严密固定防止移位。放入55℃温箱中约10分钟,在蜡将要完全溶解前,取出室温下冷却,使受体模块的蜡与新插入的小圆柱状组织溶为一体,取下蜡块,于4℃冰箱中保存备用。
 
9.切片前,蜡块需在4℃中预冷4h左右,然后夹在切片机上进行修正,等修到全部组织完整为止。用-20℃预冷冰袋贴在蜡块上5-10min左右,快速连续切片30-50张左右,再用冰袋冷冻组织块,或直接在冰冻切片机内进行,直至将组织切完为止。将4μm连续切片分别漂在凉水中,让其自然展开,按顺序将切片转移至45℃的温水中展片2min左右,将其贴在浸有APES切片黏合剂的载玻片上晾干,60℃中烤片3min左右,58℃中继续烤片18h,-20℃保存备用。
 
组织芯片制备的技术关键
1.从供体蜡块中采集组织芯时,由于外检蜡块采用普通石蜡,其韧性差、质地硬容易碎裂和使打孔针弯曲,所以要细心、耐心地采集组织芯,并可以将外检蜡块在37℃预热后再采集。
 
2. 构建好的TMA芯片中,要使组织芯和受体蜡块融合成一体,需要在55℃温箱加温。此时温度、时间调控十分重要,既要使组织芯不易掉片、滑片,又要防止受体蜡块融化移动组织芯位置。
 
3.载玻片的清洁和防止掉片处理亦是制作切片的关键不能忽视。

组织芯片受体蜡块设计
 

 

备注:在第1行第1孔不需要取出石蜡芯,仅留记号作为芯片的起点标志。
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